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    線蟲CED-9蛋白(CED-9)ELISA檢測(cè)試劑盒

    更新時(shí)間:2025-04-07      瀏覽次數(shù):472

    線蟲CED-9蛋白(CED-9)ELISA檢測(cè)試劑盒是一種用于定量檢測(cè)線蟲(如秀麗隱桿線蟲)或其相關(guān)樣本中CED-9蛋白濃度的免疫學(xué)工具。以下是關(guān)于該試劑盒的詳細(xì)信息及關(guān)鍵要點(diǎn):


    1. 試劑盒原理

    基于酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)技術(shù),利用特異性抗體與CED-9蛋白結(jié)合,通過酶標(biāo)記的二抗催化顯色反應(yīng),根據(jù)吸光度值定量分析CED-9的濃度。


    2. 主要組成成分

    • 預(yù)包被板:包被有針對(duì)CED-9的單克隆/多克隆抗體。

    • 標(biāo)準(zhǔn)品:已知濃度的CED-9重組蛋白(如His標(biāo)簽融合蛋白),用于制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。

    • 檢測(cè)抗體:酶標(biāo)記(如辣根過氧化物酶HRP)的抗CED-9抗體。

    • 底物A/B:顯色底物(如TMB)。

    • 洗滌緩沖液、封閉液、終止液等輔助試劑。

    • 說明書:實(shí)驗(yàn)步驟、注意事項(xiàng)及參考數(shù)據(jù)。


    3. 適用樣本類型

    • 線蟲組織勻漿液(如體壁、腸道、生殖腺等)。

    • 線蟲裂解液(需超聲破碎或化學(xué)裂解)。

    • 血淋巴或培養(yǎng)液中的分泌型CED-9(需驗(yàn)證是否分泌)。


    4. 關(guān)鍵參數(shù)

    • 檢測(cè)范圍:通常為0.1–100 ng/mL(具體依試劑盒而定)。

    • 靈敏度:可達(dá)pg/mL級(jí)別(高敏型試劑盒)。

    • 特異性:需確認(rèn)與其他Bcl-2家族成員(如CED-3、CED-4)的交叉反應(yīng)性。

    • 重復(fù)性:板內(nèi)CV<8%,板間CV<10%。


    5. 實(shí)驗(yàn)步驟概要

    1. 樣本準(zhǔn)備:勻漿線蟲樣本,離心取上清,測(cè)定蛋白濃度(可選)。

    2. 加樣:將樣本或標(biāo)準(zhǔn)品加入預(yù)包被板孔中,孵育(1–2小時(shí))。

    3. 洗滌:去除未結(jié)合物質(zhì)。

    4. 加檢測(cè)抗體:孵育(30分鐘–1小時(shí))。

    5. 顯色:加入底物,避光孵育(10–15分鐘)。

    6. 終止反應(yīng):加入終止液,測(cè)OD450/630 nm值。

    7. 數(shù)據(jù)分析:通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本濃度。


    6. 注意事項(xiàng)

    • 樣本處理:避免反復(fù)凍融,防止蛋白降解(建議加入蛋白酶抑制劑)。

    • 稀釋建議:超量程樣本需按說明書稀釋(如使用樣本稀釋液)。

    • 對(duì)照設(shè)置:必須包含空白孔、陰性對(duì)照(如無關(guān)抗體)和陽(yáng)性對(duì)照(如重組CED-9)。

    • 保存條件:未用試劑4°C保存,長(zhǎng)期儲(chǔ)存需-20°C(避免反復(fù)凍融)。


    7. 常見問題與解決方案

    • 信號(hào)弱或無信號(hào)

      • 檢查樣本是否含有CED-9(Western blot驗(yàn)證)。

      • 延長(zhǎng)孵育時(shí)間或優(yōu)化抗體濃度。

    • 高背景值

      • 增加洗滌次數(shù)或延長(zhǎng)洗滌時(shí)間。

      • 優(yōu)化封閉劑(如使用BSA或脫脂奶粉)。

    • 標(biāo)準(zhǔn)曲線不理想

      • 確保標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶正確,無降解。

      • 檢查底物是否過期或配制錯(cuò)誤。


    8. 應(yīng)用領(lǐng)域

    • 基礎(chǔ)研究:研究線蟲發(fā)育、凋亡調(diào)控機(jī)制(如與CED-3/CED-4的協(xié)同作用)。

    • 藥物篩選:評(píng)估抗凋亡/促凋亡化合物對(duì)CED-9表達(dá)的影響。

    • 疾病模型:分析線蟲作為模式生物在人類神經(jīng)退行性疾病中的模擬表型。

    • 企業(yè)名稱:

      常達(dá)恩生物科技(上海)有限公司

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